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日期:2014-03-13瀏覽:1258次
檢驗肺炎衣原體?我們知道elisa實驗是比較常用的,具有屬于自己的優點與特點,被常用于免疫學檢驗中。今天我們要帶領大家了解的一個實驗就是相關檢驗肺炎衣原體,下面就來看一看,滬鼎生物實驗肺炎衣原體過程,讓我們用elisa法來檢驗。
我們這個實驗的標本需要取新鮮末梢血或靜脈血。如采血后24h內不能進行試驗,分離血清后將其保存于一20℃環境中。在做檢測實驗的時候,使樣本恢復至室溫。
實驗中所需要用到的試劑:
1、濃縮酶聯物;
2、標本稀釋液;
3、終止液;
4、陽性對照;
5、弱陽性對照;
6、預包被微孔板;
7、底物A、B;
7、陰性對照。
選用elisa方法,血清加到包被純化的肺炎衣原體抗原的微滴孔中,使之發生反應,然后去除未結合的抗體,加入結合有HRP的抗人Ig抗體使之與已結合的抗體反應,結合的HRP與發色底物發生顏色反應。zui后,終止底物反應,在酶標儀上讀出光密度值。
實驗檢驗過程:
1、配制洗滌液 l瓶濃縮洗滌液加475ml蒸餾水。配好的洗滌液短期內可置室溫環境中,長期可存于2—8℃環境中。
2、配制酶聯物 按1:101倍稀釋,即取1u1濃縮酶聯物加酶聯物稀釋液1 000ul(根據檢測標本數量確定稀釋量),未用完的丟棄。
3、待試劑盒平衡至室溫后,待測標本按1;51稀釋,即取4tA血清與200u1標本稀釋液混合。
4、將稀釋標本置37℃環境中20min。
5、各加100ul陽性、弱陽性、陰性對照及已稀釋待測標本上清液于相應孔中,空白對照孔加100u1標本稀釋液,蓋好反應板,置37℃環境中30min。
6、甩盡板中液體,每孔用200~300ul洗滌液洗5次,每次均需拍干。
7、每孔加酶聯物100~1,蓋好反應板,置37℃環境中30min。
8、甩盡板中液體,洗5次,每次拍干。
9、加底物A、B各1滴或各50tzl,混勻,置37℃環境中15min。
10、取出,加終止液1滴,用酶標儀450nm測其OD值。若肉眼觀察則不加終止液,直接判斷結果。
實驗過后,我們要做一個結果判斷:
1、陰性對照平均OD值須小于0.20。
2、弱陽性對照平均OD值須在0.20—0.65。
3、弱陽性對照與陰性對照的平均OD值之比須≥2。符合以上3個條件時,本試驗結果可信,否則重復實驗。
4、若待測標本孔顯色比弱陽性對照孔深則判為陽性,反之為陰性。但在弱陽性對照值上下10%范圍內再測1次,如確實高于弱陽性對照則可判為陽性。
以上就是我們為您分享的實驗全過程啦,上海滬鼎生物在這里為大家說幾個實驗中的注意事項,這個實驗結果須結合臨床表現、病史作出診斷后,方可采取適當臨床處理。還有就是試劑盒雖然含有消除干擾因子的物質,但仍可能有少量標本難以除盡干擾。因此,如某標本多項IgM均為陽性,應考慮RF的干擾。
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